{"id":1949,"date":"2020-08-18T12:06:18","date_gmt":"2020-08-18T12:06:18","guid":{"rendered":"https:\/\/dr-rath-education.org\/?page_id=1949"},"modified":"2020-08-21T11:11:34","modified_gmt":"2020-08-21T11:11:34","slug":"mikronaehrstoffkombination-hemmt-zwei-schluessel-mechanismen-der-coronavirus-sars-cov-2-infektion-die-bindung-des-virus-an-den-ace2-rezeptor-und-seine-zellulaere-expression","status":"publish","type":"page","link":"https:\/\/dr-rath-education.org\/de\/mikronaehrstoffkombination-hemmt-zwei-schluessel-mechanismen-der-coronavirus-sars-cov-2-infektion-die-bindung-des-virus-an-den-ace2-rezeptor-und-seine-zellulaere-expression\/","title":{"rendered":"Mikron\u00e4hrstoffkombination hemmt zwei Schl\u00fcssel-Mechanismen der Coronavirus (SARS-CoV-2)-Infektion: die Bindung des Virus an den ACE2-Rezeptor und seine zellul\u00e4re Expression"},"content":{"rendered":"

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Mikron\u00e4hrstoffkombination hemmt zwei Schl\u00fcssel-Mechanismen der Coronavirus (SARS-CoV-2)-Infektion: die Bindung des Virus an den ACE2-Rezeptor und seine zellul\u00e4re Expression<\/strong><\/span><\/h2>\n

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A. Goc, Ph.D., W. Sumera, M.Sc., Vadim Ivanov, M.D., Ph.D., Aleksandra Niedzwiecki, Ph.D., Matthias Rath, M.D.
\n<\/strong>Dr. Rath Research Institute, San Jose, CA<\/strong><\/p>\n

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EINLEITUNG<\/strong><\/p>\n

Die Coronavirus-Pandemie stellt sowohl f\u00fcr die Gesundheit der Menschen weltweit als auch f\u00fcr die Weltwirtschaft eine beispiellose Herausforderung dar. Die Suche nach Impfstoffen und anderen Wegen, dieser Pandemie Einhalt zu gebieten, konzentriert sich bisher auf synthetische Molek\u00fcle, die \u2013 logischerweise \u2013 fast immer mit mehr oder weniger schweren Nebenwirkungen verbunden sind.<\/p>\n

ERGEBNISSE<\/strong><\/p>\n

In dieser Studie zeigen wir, dass eine Kombination von spezifischen Mikron\u00e4hrstoffen die Bindungsstelle des Coronavirus mit seiner \u201eAnkerstelle\u201c auf menschlichen K\u00f6rperzellen, dem ACE2-Rezeptor, fast vollst\u00e4ndig blockieren kann. Dar\u00fcber hinaus war diese Mikron\u00e4hrstoffkombination in der Lage, die Bildung (Expression) dieses ACE2-Rezeptors auf der Oberfl\u00e4che menschlicher Lungen-Epithelzellen um \u00fcber 90 % zu verringern.<\/p>\n

SCHLUSSFOLGERUNG<\/strong><\/p>\n

Diese Studie bildet die Grundlage f\u00fcr wirksame und sichere Strategien im Bereich der \u00f6ffentlichen Gesundheit, die eine optimale Zufuhr von Mikron\u00e4hrstoffen zur Grundlage haben. Sie erm\u00f6glicht es Menschen weltweit, sich aktiv an der Pr\u00e4vention von Coronavirus-Infektionen zu beteiligen. Damit erweitert die hier vorgestellte Mikron\u00e4hrstoff-Strategie die bisherigen Pr\u00e4ventions-Ma\u00dfnahmen, wie das Tragen von Masken, Social Distancing und anderen Schritte, erheblich.<\/p>\n

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EINLEITUNG<\/strong><\/p>\n

Die rasche Ausbreitung der aktuellen Coronavirus-Pandemie (COVID-19) gef\u00e4hrdet die Gesundheit der Menschen weltweit, schw\u00e4cht die Volkswirtschaften und bedroht den Wohlstand zuk\u00fcnftiger Generationen1<\/sup>. In der ersten H\u00e4lfte des Jahres 2020 waren weltweit bereits \u00fcber 16 Millionen Menschen von einer COVID-19-Infektion betroffen und mehr als 660.000 daran gestorben.2<\/sup><\/p>\n

Durch Sequenzierung des vollst\u00e4ndigen Genoms, isoliert aus Proben eines erkrankten Patienten3<\/sup>, wurde das Virus Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2 (SARS-CoV-2, deutsch Schweres akutes respiratorisches Syndrom-Coronavirus-2) identifiziert. In der Folge erhielt die durch dieses Virus verursachte Krankheit den Namen Coronavirus Disease 2019 (COVID-19), deutsch Coronavirus-Krankheit-2019.<\/p>\n

Ein weiterer wichtiger Schritt zur Eind\u00e4mmung der Ausbreitung dieser Pandemie bestand darin, den Infektionsweg von SARS-CoV-2 in die Zellen des menschlichen K\u00f6rpers zu identifizieren. Coronaviren binden zun\u00e4chst an spezifische Rezeptoren auf der Oberfl\u00e4che von Zellen. Mit Hilfe dieser Rezeptoren gelangen sie auch ins Innere der Zellen und werden \u00fcber Transportvesikel (Endosomen) weiter transportiert, bis sie schlie\u00dflich den Zellkern erreichen, wo ihr genetisches Material in die DNS der menschlichen K\u00f6rperzellen eingebaut wird.4<\/sup><\/p>\n

Von besonderer Bedeutung ist der erste Schritt des Infektionsweges, d. h. die Bindung des Virus an den Rezeptor auf der Zelloberfl\u00e4che (Abbildung 1). Beim Coronavirus beruht dieser Bindungsmechanismus auf spezifischen \u201eSpike\u201c(Stachel)-Proteinen, die auf der Oberfl\u00e4che des Virus verankert sind und eine rezeptorbindende Dom\u00e4ne (englisch Receptor-Binding Domain, RBD) enthalten. Diese spezifische Bindestelle des Virus erkennt pr\u00e4zisionsgenau ihre \u201eAndockstelle\u201c, einen spezifischen Rezeptor auf der Oberfl\u00e4che der K\u00f6rperzellen. Dieser Rezeptor, Angiotensin-Converting Enzyme 2 (ACE2) genannt, ist ein in der Zellmembran verankertes Protein. Es wurde auf der Oberfl\u00e4che zahlreicher Zellarten im gesamten menschlichen K\u00f6rper nachgewiesen \u2013 insbesondere im Herz-Kreislaufsystem, Magen-Darm-Trakt, in den Nieren und der Lunge.5, 6<\/sup><\/p>\n

Dieser Bindungsmechanismus hat einen erheblichen Einfluss auf die F\u00e4higkeit des Virus, K\u00f6rperzellen zu infizieren sowie eine Coronavirus(COVID-19)-Erkrankung auszul\u00f6sen. Daher spielt dieser Bindungsmechanismus auch bei der Entwicklung von Impfstoffen und anderen Therapie-ans\u00e4tzen eine bedeutende Rolle.7, 8<\/sup><\/p>\n

W\u00e4hrend die Suche nach einem solchen Impfstoff oder Medikament weitergeht, gibt es bereits jetzt einen viel direkteren \u2013 und vor allem sichereren \u2013 Weg, um diese verh\u00e4ngnisvolle Interaktion von Coronaviren mit dem ACE2-Rezeptor der K\u00f6rperzellen zu verhindern: die Unterdr\u00fcckung der Bildung (Expression) von ACE2-Rezeptoren auf der Oberfl\u00e4che von menschlichen K\u00f6rperzellen, die somit erst gar nicht mehr zum Andocken f\u00fcr die Coronaviren zur Verf\u00fcgung stehen.<\/p>\n

In einer k\u00fcrzlich ver\u00f6ffentlichten bahnbrechenden Studie konnten wir zeigen, dass eine bestimmte Kombination von Mikron\u00e4hrstoffen, bestehend aus Vitamin C, bestimmten Mineralstoffen, Aminos\u00e4uren und Pflanzenextrakten, die zellul\u00e4re ACE2-Expression in den wichtigsten Zelltypen signifikant verringert, auf die das Virus abzielt. Besonders betroffen sind dabei die Epithelzellen der kleinen Atemwege (Alveolen), kurz \u201eLungen-Epithelzellen\u201c, sowie die Endothelzellen der menschlichen Blutgef\u00e4\u00dfe, die \u201eGef\u00e4\u00dfEndothelzellen\u201c. Unter Entz\u00fcndungsbedingungen, wie sie bei der COVID-19-Infektion und bei anderen Infektionen auftreten, unterdr\u00fcckten die Mikron\u00e4hrstoffe die Ausbildung der ACE2-Rezeptoren besonders ausgepr\u00e4gt.9<\/sup><\/p>\n

Die bemerkenswerten Ergebnisse dieser Studie warfen die Frage auf, ob Mikron\u00e4hrstoffe auch in der Lage sind, einen anderen Mechanismus zu beeinflussen, der f\u00fcr Coronavirus-Infektionen entscheidend ist: die Bindung des Virus<\/p>\n

an den ACE2-Rezeptor. Unsere Versuche zielten darauf ab, den Eintritt des Virus in die menschlichen Zellen zu hemmen \u2013 also exakt denselben Vorgang wie alle derzeit entwickelten Impfstoffe.<\/p>\n

Sollten die Ergebnisse dieser Studie positiv ausfallen, st\u00fcnde ein neuer, nat\u00fcrlicher und sicherer Ansatz zur Verf\u00fcgung, um die aktuelle Pandemie wirksam zu bek\u00e4mpfen.<\/p>\n

In der vorliegenden Studie haben wir daher die Wirkung einer weiteren Mikron\u00e4hrstoffzusammensetzung, die Polyphenole und Pflanzenbestandteile enthielt, auf die zwei Schl\u00fcsselfaktoren einer Infektion mit SARS-CoV-2 untersucht: die Hemmung des ACE2-Rezeptors und \u2013 parallel dazu \u2013 die Blockierung der Bindung eines spezifischen SARS-CoV-2-Spike-Proteins an den ACE2-Rezeptor auf menschlichen Zellen (Abbildung 1).<\/p>\n

\"\"Abbildung 1:<\/em>
\nA: Coronaviren infizieren menschliche K\u00f6rperzellen \u00fcber den ACE2-Rezeptor.<\/em>
\nB: Prinzip des kommerziell erh\u00e4ltlichen Testverfahrens, das in dieser Studie zur Messung der Interaktion zwischen dem rezeptorbindenden Protein (RBD) des Coronavirus (SARS-CoV-2) und dem ACE2-Rezeptor auf der Oberfl\u00e4che von K\u00f6rperzellen verwendet wird.<\/em><\/p>\n

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ERGEBNISSE<\/strong><\/p>\n

Wirksamkeit einer spezifischen Mikron\u00e4hrstoffkombination auf die Expression von ACE2-Rezeptoren in menschlichen Lungen-Epithelzellen.<\/p>\n

Abbildung 2 zeigt die Wirkungen unterschiedlicher Konzentrationen einer spezifischen Kombination verschiede- ner aktiver Pflanzenstoffe und -extrakte auf die zellul\u00e4re Ausbildung (Expression) von ACE2-Rezeptoren in menschlichen Epithelzellen der kleinen Atemwege (Alveolen).<\/p>\n

\"\"Abbildung 2:<\/em>
\nWirksamkeit der Mikron\u00e4hrstoffkombination auf die Expression<\/em>
\ndes ACE2-Rezeptors in menschlichen Lungenzellen (Alveolar-Epithelzellen). Ver\u00e4nderungen der ACE2- Expression werden in % der Kontrolle angegeben.<\/em><\/p>\n

Die Untersuchungsergebnisse zeigen eine Abnahme der ACE2-Rezeptorbildung, abh\u00e4ngig von der Konzentration der Mikron\u00e4hrstoff-Kombination. Bei der h\u00f6chsten Mikron\u00e4hrstoffkonzentration (320 ug\/mL) nahm die Expression der zellul\u00e4ren ACE2-Rezeptoren um 92 % ab. Dies deutet darauf hin, dass in Gegenwart dieser Mikron\u00e4hrstoffe die Bindung des Virus an die Rezeptoren der K\u00f6rperzellen deutlicht verringert werden kann, da diese Rezeptoren kaum noch ausgebildet werden.<\/p>\n

Die direkte Wirksamkeit der Mikron\u00e4hrstoffkombination auf die Andockung des Virus an den ACE2- Rezeptor
\nDie Interaktion der Bindungsstelle des Virus (RBD-Sequenz des SARS-CoV-2 Spike-Proteins) an seinen Zellrezeptor ist der notwendige Schritt f\u00fcr das Eindringen des Virus in die K\u00f6rperzellen und Voraussetzung f\u00fcr eine Infektion.<\/p>\n

Wir untersuchten die F\u00e4higkeit der beschriebenen Kombination aktiver Pflanzenstoffe, diese Interaktion zwischen der Bindungsstelle des SARS-CoV-2-Spike- Proteins mit dem menschlichen ACE2-Rezeptor zu hemmen. In unserer Studie verwendeten wir ein hochempfindliches Testsystem, das den neuesten wissenschaftlichen Erkenntnissen entsprach. Mit Hilfe dieses Systems k\u00f6nnen Molek\u00fcle nachgewiesen werden, die in der Lage sind, die Interaktion der rezeptorbindenden Dom\u00e4ne (RBD) des Virus-Spike-Proteins mit dem Zell-ACE2-Rezeptor zu blockieren.<\/p>\n

\"\"Abbildung 3:<\/em>
\nHemmung der Bindung<\/em>
\nder Virus-Bindungsstelle (Rezeptor-Bindungs-Dom\u00e4ne des SARS-CoV-2-Spike Proteins) an den Zell-ACE2- Rezeptor durch spezifische Mikron\u00e4hrstoffkombination. Angaben in % der Kontrolle, <\/em>\u201eBlocking Control\u201c = 100%ige Bindungshemmung.<\/em><\/p>\n

Abbildung 3 zeigt, dass die Versuchskombination aus pflanzlichen Naturstoffen in der Lage war, die Bindung der RBD-Dom\u00e4ne auf dem Spike-Protein des SARS- CoV-2-Virus an seinen ACE2-Rezeptor zu blockieren. Diese hemmende Wirkung war konzentrationsabh\u00e4ngig und verursachte bei einer Mikron\u00e4hrstoff-Konzentration von 100 \u00b5g\/mL eine Bindungshemmung von 97 %. Eine deutliche Wirkung der Mikron\u00e4hrstoff- Kombination auf die Hemmung der Virusbindung an den Zelloberfl\u00e4chen -Rezeptor wurde schon bei einer 40-fach niedrigeren Konzentration, d.h. 2,5 \u00b5g\/mL, beobachtet, wobei bereits eine Bindungshemmung von etwa 20 % erreicht wurde.<\/p>\n

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DISKUSSION<\/strong><\/p>\n

Bedeutung unserer Ergebnisse<\/strong><\/p>\n

Die in dieser Studie vorgestellten Ergebnisse belegen, dass Mikron\u00e4hrstoffe wichtige zellul\u00e4re Mechanismen der Coronavirus-Infektion wirksam hemmen k\u00f6nnen.<\/p>\n

Diese Ergebnisse stehen in einem entscheidenden Moment zur Verf\u00fcgung, da die Wissenschaft und die Medizin weltweit verzweifelt nach wirksamen Ma\u00dfnahmen gegen die COVID-19-Pandemie suchen.<\/p>\n

Mit Hilfe wissenschaftlicher Methoden und modernster Techniken, die im Rahmen der Coronavirus-Forschung zum Einsatz kommen, konnten wir zeigen, dass Mikron\u00e4hrstoffe die Interaktion der Virus-Bindungsstelle (RBD des Spike-Protein von SARS-CoV-2) und dem spezifischen Zell-Rezeptor (ACE2) um 97 % hemmen k\u00f6nnen. Dies bedeutet, dass Mikron\u00e4hrstoffe das Risiko einer Virusinfektion fast vollst\u00e4ndig verhindern k\u00f6nnten. Dar\u00fcber hinaus hemmte dieselbe Mikron\u00e4hrstoffzusammensetzung die Expression von ACE2-Rezeptoren auf menschlichen Lungenzellen (Alveolar-Epithelzellen) um bis zu 92 %.<\/p>\n

In einer fr\u00fcheren Publikation hatten wir berichtet, dass eine weitere Kombination von Mikron\u00e4hrstoffen, darunter Vitamin C, Aminos\u00e4uren, Pflanzeninhaltsstoffe sowie Mineralstoffe, die Bildung von ACE2-Rezeptoren signifikant verringern konnten. Dieser Nachweis wurde an zwei Zellarten gef\u00fchrt, die bevorzugt vom Coronavirus angegriffen werden \u2013 menschlichen Lungen-Epi- thelzellen und menschlichen Gef\u00e4\u00df-Endothelzellen.<\/p>\n

Ein weiteres wichtiges Ergebnis dieser fr\u00fcheren Studie war, dass die Hemmung der ACE2-Bildung unter Entz\u00fcndungsbedingungen, wie sie bei jeder Virusinfektion auftreten, noch ausgepr\u00e4gter war. Dies w\u00fcrde bedeuten, dass die Wirksamkeit von Mikron\u00e4hrstoffen unter klinischen Bedingungen und in fortgeschrittenen Stadien von COVID-19, die durch eine generalisierte Entz\u00fcndung und einen sogenannten \u201eZytokin-Sturm\u201c (explosionsartiger Anstieg entz\u00fcndlicher Signalstoffe) gekennzeichnet sind, noch ausgepr\u00e4gter ist.<\/p>\n

Die Ergebnisse dieser neuen Studie deuten darauf hin, dass spezifische Zusammensetzungen von biologisch aktiven Pflanzenstoffen zur gleichen Zeit zwei entscheidende Mechanismen kontrollieren k\u00f6nnen, die die F\u00e4higkeit des Coronavirus bestimmen, eine Infektion zu verursachen.<\/p>\n

In Anbetracht unserer Ergebnisse ist es besonders entt\u00e4uschend, dass die zahlreichen wissenschaftlichen und klinischen Beweise, die die Wirksamkeit von Mikron\u00e4hrstoffen bei vielen Aspekten von Virusinfektionen belegen, bislang weitgehend ignoriert wurden.10, 11, 12, 13<\/sup><\/p>\n

Der Beweis, dass Mikron\u00e4hrstoffe die Antwort auf das Coronavirus und andere Pandemien sein k\u00f6nnten, sollte Wissenschaftler und Mediziner dazu ermutigen, sich weltweit um die Gewinnung neuer Kenntnisse \u00fcber den therapeutischen Wert von Mikron\u00e4hrstoffen bei der Pr\u00e4vention von Infektionskrankheiten zu bem\u00fchen.<\/p>\n

Konsequenzen dieser Erkenntnisse f\u00fcr die Gesundheitspolitik<\/strong><\/p>\n

Das Ausma\u00df der aktuellen Pandemie und die Dimension ihrer Auswirkungen auf die Gesundheit der Menschen ebenso wie die Wirtschaft macht diese Mikron\u00e4hrstoff- Studie zu einem entscheidenden Beitrag zur Kontrolle dieser Pandemie.<\/p>\n

Dies ist besonders wichtig, da alle anderen Ma\u00dfnahmen, die derzeit entwickelt werden, entweder mit erheblichen Nebenwirkungen verbunden sind oder es sich um neue und unerprobte Therapieans\u00e4tze handelt. Die au\u00dferordentlich heftigen Reaktionen der internationalen Expertengemeinschaft auf die ersten registrierten Impfstoffe, die auf viralen Genen basieren, zeugen von dem Bewusstsein f\u00fcr die potenziellen Risiken, die mit einer bev\u00f6lkerungsweiten Einf\u00fchrung solch neuartiger Therapien verbunden sind.<\/p>\n

Auf der Grundlage unserer Studienergebnisse steht nunmehr ein wissenschaftlich getesteter, auf Mikron\u00e4hrstoffen basierender Ansatz als wirksame \u2013 und sichere \u2013 Strategie zur Bek\u00e4mpfung der aktuellen Pandemie zur Verf\u00fcgung. Mit einer Blockierungsrate von nahezu 100 % stehen Mikron\u00e4hrstoffe der Wirksamkeit jedes Impfstoff-Konzepts in nichts nach \u2013 und das ohne unkalkulierbare Risiken. Dar\u00fcber hinaus hat dieser Ansatz weitere entscheidende Vorteile im Bezug auf die Kontrolle von Coronavirus-Infektionen, wie eine signifikante Abnahme der Verf\u00fcgbarkeit von Virus-\u201eAnkern\u201c auf der Oberfl\u00e4che menschlicher Zellen sowie eine allgemeine St\u00e4rkung der Immunfunktion.<\/p>\n

Ein auf Mikron\u00e4hrstoffen basierender Ansatz erm\u00f6glicht es auch der gesamten Bev\u00f6lkerung, sich aktiv an der Pr\u00e4vention von Coronavirus-Infektionen zu beteiligen. Diese Mikron\u00e4hrstoff-basierte Strategie geht somit weit hinaus \u00fcber das Tragen von Masken, Social Distancing und anderen passiven Ma\u00dfnahmen.<\/p>\n

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REFERENZEN<\/strong><\/p>\n

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  1. Chakraborty I, Maity COVID-19 outbreak:\u00a0Migration, effects on society, global environment and prevention.<\/a>\u00a0Sci Total Environ. 2020; 728: 138882. https:\/\/dx.doi.org\/10.1016%2Fj.scitotenv.2020.138882<\/li>\n
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  3. Zhu N, Zhang D, Wang W, et al.\u00a0A novel coronavirus from patients with pneumonia in China, 2019<\/a>. N. Engl. J. Med. 2020; 382(8): 727-733. doi: 1056\/NEJMoa2001017<\/li>\n
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  5. Li W, Moore MJ, Vasilieva N, et al.\u00a0Angiotensin- converting enzyme 2 is a functional receptor for the SARS coronavirus<\/a>. Nature. 2003; 426(6965): 450\u2013454. https:\/\/doi.org\/10.1038\/nature02145<\/li>\n
  6. Hofmann H, Pyrc K, van der Hoek L, Geier M, Berkhout B, Pohlmann S.\u00a0Human coronavirus NL63 employs the severe acute respiratory syndrome coronavirus receptor for cellular entry.<\/a>\u00a0Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2005; 102(22):7988\u2013 7993. https:\/\/doi.org\/10.1073\/pnas.0409465102<\/li>\n
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  8. Du L, He Y, Zhou Y, Liu S, Zheng BJ, Jiang.\u00a0MERS-CoV Spike protein: a key target for antivirals. Expert Opin Ther Targets<\/a>. 2017; 21(2): 131-143. doi:10.1080\/14728222.2017.1271415<\/li>\n
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  10. Jariwalla RJ, Roomi MW, Gangapurkar B, Kalinovsky T, Niedzwiecki A, Rath M.\u00a0Suppression of influenza A virus nuclear antigen production and neuraminidase activity by a nutrient mixture containing ascorbic acid, green tea extract and amino acids<\/a>. 2007; 31(1): 1-15.\u00a0doi: 10.1002\/biof.5520310101<\/li>\n
  11. Jariwalla R, Gangapurkar B, Pandit A, Kalinovsky T, Niedzwiecki A, Rath M.\u00a0Micronutrient Cooperation in Suppression of HIV Production in Chronically and Latently Infected Cells<\/a>. Mol Med 2010; 3(3): 377-85.\u00a0doi: 10.3892\/mmr_00000268.<\/li>\n
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    MATERIAL UND METHODEN<\/strong><\/p>\n

    Zellkulturen<\/strong><\/p>\n

    Menschliche Epithelzellen der kleinen Atemwege (Alveolar-Epithelzellen, Small Airways Epithelial Cells, SAEC) von ATCC (American Type Culture Collection) wurden in einem Wachstumsmedium (ATCC) in Plastikkolben bei 37\u00b0C und 5% CO2 kultiviert. F\u00fcr das Experiment wurden die SAECs Passage 5-7 auf kollagenbehandelte 96-Well-Plastikplatten (Corning) in 100 \u03bcL Wachstumsmedium aufgetragen und 4-7 Tage lang zu einer konfluenten Zellschicht kultiviert.<\/p>\n

    Mikron\u00e4hrstoffzusammensetzung<\/strong><\/p>\n

    Die verwendete Mikron\u00e4hrstoffkombination wurde am Dr. Rath Forschungsinstitut (San Jose, Kalifornien) entwickelt. Die Versuchsformulierung enthielt: 400 mg Quercetin, 400 mg Kreuzbl\u00fctler(Cruciferae)-Extrakt, 300 mg Gelbwurzel(Curcuma)-Extrakt, 300 mg Gr\u00fcntee-Extrakt (80 % Polyphenole) und 50 mg Resveratrol.<\/p>\n

    Supplementierung der Zellen<\/strong><\/p>\n

    Die nach dem Protokoll der US-Pharmakop\u00f6e (USP 2040) in 0,1N HCl gel\u00f6ste Mischung wurde als Stamml\u00f6sung bezeichnet. F\u00fcr die Versuche zur ACE2-Expression wurden die Zellen den angegebenen Konzentrationen der Mikron\u00e4hrstoff-Kombination in 100 \u03bcL\/well im Wachstumsmedium f\u00fcr 3-7 Tage ausgesetzt. Die Anwendungskonzentrationen der Supplemente wurden als Millionstel Teile einer Stammkonzentration pro ml (\u03bcg\/ml) angegeben.<\/p>\n

    ACE-2 ELISA assay<\/strong><\/p>\n

    Die Kulturplatten-Wells (Vertiefungen) der Versuchsanordnung wurden zweimal mit einer phosphatgepufferten Kochsalzl\u00f6sung (PBS) gewaschen und mit 3 % Formaldehyd\/0,5% Triton X100\/PBS-L\u00f6sung f\u00fcr 1 Stunde bei 4\u00b0C fixiert und dann viermal mit PBS gewaschen. 200 \u03bcL von 1 % Rinderserumalbumin (BSA, Sigma) in PBS wurde hinzugef\u00fcgt. Die Platte wurde dann \u00fcber Nacht bei 4\u00b0C inkubiert. Zu 100 \u03bcl 1 %BSA\/PBS wurden polyklonale Kaninchen-Anti-ACE-2-Antik\u00f6rper (Sigma) f\u00fcr eine eineinhalbst\u00fcndige Inkubation bei Raumtemperatur (RT) hinzugef\u00fcgt. Nach drei Waschzyklen mit 0,1
    \n% BSA\/PBS wurden die Vertiefungen (Wells) der Kulturplatten mit 100 \u03bcL Kaninchen-anti-IgG-Antik\u00f6rpern, die mit Meerrettichperoxidase (HRP, Fa. Sigma) konjugiert waren, f\u00fcr 1 h bei Raumtemperatur (RT) versetzt. Nach<\/p>\n

    drei Waschzyklen mit 0,1%BSA\/PBS wurde die verbleibende HRP-Aktivit\u00e4t durch Inkubation mit 100 \u03bcl TMB- Substratl\u00f6sung (Fa. Sigma) f\u00fcr 20 min bei RT bestimmt, gefolgt von der Zugabe von 50 \u03bcl von 1N H2SO4 und optischer Dichtemessung bei 450 nm mit einem Mikroplatten-Leseger\u00e4t (Molecular Devices). Die Ergebnisse werden als Prozentsatz der experimentellen Kontrolle ohne Zus\u00e4tze ausgedr\u00fcckt (Mittelwert +\/- SD, n=6). Der Mittelwert der nicht-spezifischen Kontrolle (Wells, die ohne Anti-ACE2-Antik\u00f6rper inkubiert wurden) (n=6) wurde von allen Probenwerten abgezogen.<\/p>\n

    Blockierung von RBD (rezeptorbindende Dom\u00e4ne) Dieser Assay wurde mit einem GenScript SARS-CoV-2 Surrogat-Virus-Neutralisierungs-Testkit durchgef\u00fchrt, der entweder Antik\u00f6rper oder Inhibitoren erkennen kann, die die Interaktion zwischen der rezeptorbindenden Dom\u00e4ne (RBD) des viralen Spike-Proteins und dem ACE2-Zelloberfl\u00e4chenrezeptor blockieren.<\/p>\n

    Alle Versuchsproben mit den angegebenen Konzentrationen und den Positiv- und Negativkontrollen (Teil des GenScript-Testkits) wurden mit dem Probenverd\u00fcnnungspuffer mit einem Volumenverh\u00e4ltnis von 1:9 verd\u00fcnnt. In getrennten R\u00f6hrchen wurde HRP-konjugierte RBD ebenfalls mit dem HRP-Verd\u00fcnnungspuffer im Volumenverh\u00e4ltnis 1:99 verd\u00fcnnt.<\/p>\n

    Die Bindungs-\/Neutralisierungsreaktion wurde gem\u00e4\u00df dem Protokoll des Herstellers durchgef\u00fchrt. Kurzzeitig wurden verd\u00fcnnte Positiv- und Negativkontrollen sowie die Versuchsproben mit den angegebenen Konzentrationen mit der verd\u00fcnnten HRP-RBD-L\u00f6sung im Volumenverh\u00e4ltnis 1:1 gemischt und 30 Minuten bei 37\u00b0C inkubiert. Anschlie\u00dfend wurden je 100 \u00b5l der Positiv- kontrollmischung, der Negativkontrollmischung und der Mischungen der Testproben in die entsprechenden Wells mit immobilisiertem ACE2-Rezeptor gegeben und 15 Minuten bei 37\u00b0C inkubiert. Anschlie\u00dfend wurden die Platten viermal mit 260 \u00b5l\/Well der 1 x Waschl\u00f6sung gewaschen und TMB-L\u00f6sung in jede Vertiefung (100 \u00b5l\/Well) gegeben. Die Platten wurden im Dunkeln bei Raumtemperatur bis zu 5 Minuten lang inkubiert. Anschlie\u00dfend wurden 50 \u00b5l\/Well der Stamml\u00f6sung zugegeben, um die Reaktion abzuschw\u00e4chen, und die Absorption wurde sofort im Plattenleser bei 450 nm gemessen. Das Experiment wurde dreimal in Duplikaten durchgef\u00fchrt. Die Werte werden in % der Kontrolle angegeben.<\/p>\n

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    Quelle:<\/strong> https:\/\/www.jcmnh.org\/micronutrient-combination-inhibits-two-key-steps-of-coronavirus-sars-cov-2-infection-viral-binding-to-ace2-receptor-and-its-cellular-expression\/<\/a>[\/vc_column_text][vc_column_text]Download:<\/strong><\/p>\n

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